在细胞培养实验室中，Trypan Blue染料常用于选择性染色死细胞和组织。然而，使用这种染料在某些类型的样本中准确评估细胞计数和存活率时可能面临挑战。
未经过额外复杂耗时的纯化步骤的原始细胞样本通常含有难以使用Trypan Blue计数的污染物和非核细胞。
DeNovix提供的采用荧光染料Acridine Orange（AO）和Propidium Iodide（PI）进行存活性评估的方法为这类样本提供了一种用户友好且更准确的替代方法。
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使用Trypan Blue进行细胞计数
Trypan Blue通过最小化污染物的存在来有效评估细胞样本的存活性。除非细胞膜受损，否则染料不会进入活细胞。在这个测试中，死细胞被染成特征性的蓝色，而活细胞保持透明。
DeNovix CellDrop™自动细胞计数器上提供的Trypan Blue应用程序可用于计数活细胞和死细胞、确定细胞浓度和执行存活性评估。该软件将活细胞检测为具有明亮白色中心和清晰定义的深色轮廓的物体。染色细胞被检测为与背景形成对比的黑暗物体。
Trypan Blue在洁净样本中最有效，例如从培养皿或培养板中分离后的组织细胞培养细胞。在包含污染物的样本中，难以区分活细胞和污染物，导致对细胞计数和存活率的高估。
使用AO/PI进行细胞计数
AO是一种与核酸结合且能渗透细胞膜的染料。该染料可染色样本中所有细胞的细胞核。PI是一种与核酸结合但不渗透活细胞的染料。它非常适合染色死的核细胞。
DeNovix开发的AO/PI存活性测定方法结合了这两种染料，并针对核细胞的准确计数和评估进行了优化。CellDrop FL自动细胞计数器配备了AO/PI应用程序，该应用利用了明场、绿色荧光和红色荧光通道的图像。
活的核细胞通过AO染料表现出绿色荧光。AO和PI染料之间的重叠Foerster共振能量转移（FRET）导致死的核细胞被染成红色。非核细胞以及细胞污染物保持未染色。
AO/PI测定法在分析含有污染物的核细胞样本中表现出色。例如，使用Trypan Blue等明场技术很难计数的外周血单个核细胞（PBMC）可以使用AO/PI进行准确计数。这是因为染料无法区分的非核红细胞的高背景。
使用AO/PI对这些样本进行计数更简单、更准确。在这些复杂样本中，核细胞很容易通过绿色荧光（表示活细胞）或红色荧光（表示死细胞）与无荧光细胞区分开来（如图2所示）。
关于DeNovix, Inc.
DeNovix Inc.致力于制造满足当今科学技术要求的实验室设备。他们的目标是提供创新产品和卓越的客户服务。DeNovix具备交付具有突破性的产品以促进您的研究成功所需的财务、商业和技术资源。
DeNovix屡获殊荣的产品包括DS-11系列分光光度计/荧光计和CellDrop™自动细胞计数器。每台设备都是完全网络化的独立系统，具有高清触摸屏和科学家专为科学家设计的EasyApps™软件。实验室对该仪器的直观操作、出色性能和广泛的连接选项赞不绝口。
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常见问题解答
1. Trypan Blue是什么，它在细胞培养中如何使用？
Trypan Blue是在细胞培养实验室常用的染料，用于选择性染色死细胞和组织。它被用于评估样本的细胞计数和存活性。
2. Trypan Blue如何在细胞存活性评估中起作用？
除非细胞膜受损，否则Trypan Blue不会进入活细胞。死细胞被染成蓝色，而活细胞保持透明。
3. Trypan Blue在细胞计数中存在哪些挑战？
原始细胞样本中含有污染物和非核细胞，这使得使用Trypan Blue进行准确计数变得困难。
4. 使用AO和PI染料的荧光法细胞计数是什么？
Acridine Orange（AO）和Propidium Iodide（PI）染料结合的存活性评估方法是对含有污染物样本的一种更准确的替代方法。AO染料染色样本中所有细胞的细胞核，而PI染料染色死细胞。
5. AO/PI测试如何在细胞计数中起作用？
AO/PI测试利用AO染料的绿色荧光标记活细胞，利用PI染料的红色荧光标记死细胞。这可以实现精确的细胞计数和存活性评估。
6. 在含有污染物的样本中，为什么AO/PI测试比Trypan Blue更有效？
在含有污染物的样本中，Trypan Blue很难区分活细胞和污染物。然而，AO/PI测试更准确，因为核细胞可以通过绿色和红色荧光轻松区分。
7. DeNovix，Inc.专注于什么领域？
DeNovix，Inc.专注于制造满足当今科学技术要求的实验室设备。他们的产品，如DS-11系列分光光度计/荧光计和CellDrop™自动细胞计数器，获奖无数，并为实验室提供创新解决方案。
8. 使用DeNovix仪器有哪些好处？
DeNovix仪器，如CellDrop™自动细胞计数器，配备了先进的应用程序，可实现准确的细胞计数和存活性评估。它们还具有直观的界面、高质量的屏幕和广泛的连接选项。
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关键术语和术语的定义：
- Trypan Blue：在细胞培养中常用的一种染料，用于选择性染色死细胞和组织。
- Acridine Orange（AO）：一种荧光染料，可染色样本中所有细胞的细胞核。
- Propidium Iodide（PI）：一种荧光染料，可染色死的核细胞。
- FRET（Förster Resonance Energy Transfer）：AO和PI染料之间的重叠光能传递，导致死的核细胞染色为红色。
- DeNovix CellDrop™：DeNovix的自动细胞计数器，具备高级应用程序，可进行准确的细胞计数和存活性评估。
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